正交设计优化万古霉素/聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球的制备及体外药物释放

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.1509

中国组织工程研究 ›› 2019, Vol. 23 ›› Issue (2): 211-217.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.1509

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正交设计优化万古霉素/聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球的制备及体外药物释放

刘亚珍¹，邱晓明^1，2，李松凯²

¹甘肃省人民医院，甘肃省兰州市 730000；²兰州总医院骨科中心，甘肃省兰州市 730000

收稿日期:2018-05-21 出版日期:2019-01-18 发布日期:2019-01-18
通讯作者: 李松凯，博士，副主任医师，兰州总医院骨科中心，甘肃省兰州市 730000
作者简介:刘亚珍，女，1965年生，北京市人，汉族，甘肃省中医药大学毕业，主管护师，主要从事耳鼻喉细菌感染及耐药研究。
基金资助:
甘肃省自然科学基金资助项目(1308RJZA146，项目负责人：李松凯)；全军医药卫生科研基金课题(CLZ14JB03，项目负责人：李松凯)

Orthogonal optimization of vancomycin/poly(lactic-co-glycolic acid) microspheres: preparation and drug release in vitro

Liu Yazhen¹, Qiu Xiaoming^{1, 2}, Li Songkai²

¹Gansu Province People’s Hospital, Lanzhou 730000, Gansu Province, China; ² Department of Orthopedics, Lanzhou Military Region General Hospital, Lanzhou 730000, Gansu Province, China

Received:2018-05-21 Online:2019-01-18 Published:2019-01-18
Contact: Li Songkai, MD, Associate chief physician, Department of Orthopedics, Lanzhou Military Region General Hospital, Lanzhou 730000, Gansu Province, China
About author:Liu Yazhen, Nurse-in-charge, Gansu Province People’s Hospital, Lanzhou 730000, Gansu Province, China
Supported by:
the Natural Science Foundation of Gansu Province, No. 1308RJZA146 (to LSK); the PLA Medical and Health Research Fund Project, No. CLZ14JB03 (to LSK)

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：

聚乳酸-羟基乙酸：属于聚乳酸类共聚物，被美国食品药品监督管理局批准并成为了多种药物的缓释载体，广泛应用于商业及实验研究，具有良好的生物相容性、机械强度、可控的生物降解性。在降解过程中转变为乳酸和羟基乙酸，在体内无蓄积毒副作用。

万古霉素：是一线糖肽类抗生素，是对付顽固性耐药菌株的最后一道防线。基于它可直接阻断细菌细胞壁的合成而抑菌的特点，局部给药不仅能发挥其抗菌作用，还能大幅减少全身不良反应。

背景：尽管现代抗生素和外科技术进步巨大，但在治疗如深部软组织感染或骨感染，特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染时，全身长期应用抗生素治疗容易出现肾毒性、耳毒性和胃肠道等毒副作用，且费用昂贵，疗效不确定。而局部给药系统可以在感染局部实现持续释放高浓度的抗生素，从而更有效的控制和治疗感染，明显降低全身抗生素治疗的毒副作用。将万古霉素用聚乳酸-羟基乙酸共聚物包载成微球后，随着微球在体内逐渐降解、吸收，可在感染处长时间维持有效抑菌浓度，实现局部抗感染作用。

目的：用正交设计实验对万古霉素/聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球的制备工艺进行优选，制备出粒径均匀的万古霉素聚乳酸-羟基乙酸共聚物缓释微球，同时检测其体外药物释放及抑菌性能。

方法：用复乳溶剂挥发法，以微球载药率和包封率为主要考察指标，对不同的聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液浓度、内水相药物浓度、外水相聚乙烯醇浓度、搅拌转速4个工艺条件进行四因素三水平的正交实验。

结果与结论：最佳工艺条件为油相9 mL：聚乳酸-羟基乙酸共聚物 500 mg、内水相1 mL：万古霉素300 mg、外水相：聚乙烯醇溶液浓度为3%、转速400 r/min；其他三因素不变，搅拌速率为400，800，1 200 r/min时制备出了粒径(232±26) µm、(157±23) µm、(102±37) µm的微球；选用平均粒径为(102±37) µm的微球，测定其载药率为(17.40±1.87)%；包封率为(35.12±3.65)%，体外药物释放显示微球在第1天药物释放率为(17.91±2.41)%，有一定突释，2 d后释放率逐渐降低放缓，12 d时累计释放(58.78±1.54)%，12-24 d平均每天释放1.41%，于24 d时累计释放(75.31±1.02)%。说明采用最佳工艺可制备粒径均匀药物释放平稳的万古霉素/聚乳酸-羟基乙酸共聚物缓释微球。

ORCID: 0000-0002-9200-2390(李松凯)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

关键词: 万古霉素, 聚乳酸-羟基乙酸共聚物, 微球, 正交, 载药率, 包封率, 药物释放, 体外抑菌, 生物材料

Abstract:

BACKGROUND: Despite the advances in modern antibiotics and surgical techniques, the long-term systemic use of antibiotics for deep soft tissue infections or bone infections, especially methicillin-resistant Staphylococcus aureus infections, is susceptible to nephrotoxicity, ototoxicity and toxic and side effects on the gastrointestinal tract. Moreover, it is expensive and its efficacy is uncertain. The local drug delivery system can achieve sustained-release of high concentrations of antibiotics in the local infection, thereby more effectively controlling and treating infections, and significantly reducing the side effects of systemic antibiotic treatment. Vancomycin is encapsulated into poly(lactic-co-glycolic acid) copolymer microspheres carrying vancomycin are gradually degraded and absorbed in the body, and the effective inhibitory concentration of vancomycin can be maintained for a long time at the infection site to achieve local anti-infection effects.

OBJECTIVE: To optimize the preparation process of vancomycin/poly(lactic-co-glycolic acid) microspheres by orthogonal design experiments, then to prepare the vancomycin/poly(lactic-co-glycolic acid) sustained-release microspheres with uniform particle size, and to test their drug release and antibacterial properties in vitro at the same time.

METHODS: Using double-emulsion solvent evaporation method, taking the drug loading rate and entrapment efficiency of microspheres as the main indicators, the orthogonal experiments of four factors and three levels were carried out under four different process conditions, including the concentration of poly(lactic-co-glycolic acid) solution, the concentration of internal water phase, the polyvinyl alcohol concentration of external water phase and the speed of agitation.

RESULTS AND CONCLUSION: The optimum conditions were as follows: oil phase 9 mL: poly(lactic-co-glycolic acid) 500 mg, internal water phase 1 mL vancomycin 300 mg, external water phase: polyvinyl alcohol concentration was 3%, the speed: 400 r/min. When the other three factors were unchanged and the stirring rate was 400, 800 and 1 200 r/min, the microspheres with the particle size of (232±26), (157±23), (102±37) µm were prepared. For the microspheres with an average particle size of (102±37) µm, the drug loading rate was (17.40±1.87)% and the entrapment efficiency was (35.12±3.65)%. The drug release in vitro showed that the release rate of the microspheres on the 1^st day was (17.91±2.41)%, and there was a certain burst of release. After 2 days, the release rate gradually decreased and slowed down, the cumulative release was (58.78±1.54)% at the 12^th day, the average daily release was 1.41% from the 12^th to the 24^th day, and the total release was (75.31±1.02)% at the 24^th day. These findings indicate that using the optimal preparation process, we can prepare vancomycin/ poly(lactic-co-glycolic acid) sustained-release microspheres with uniform particle size and smooth drug release.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

Key words: Vancomycin Resistance, Microspheres, Tissue Engineering

中图分类号:

R452

R313

刘亚珍, 邱晓明, 李松凯. 正交设计优化万古霉素/聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球的制备及体外药物释放[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(2): 211-217.

Liu Yazhen, Qiu Xiaoming, Li Songkai. Orthogonal optimization of vancomycin/poly(lactic-co-glycolic acid) microspheres: preparation and drug release in vitro[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2019, 23(2): 211-217.

图/表（结果） 7

2.1 微球形态裸眼可见微球呈均匀白色粉末状，分散良好无黏连。光镜下微球呈规则圆形，直径为(200±60) μm，见图2。

2.2 标准曲线根据上述方法得到数据绘制万古霉素标准曲线，见图3，回归方程为y=0.004 8x-0.008 7，R²=0.999 7，万古霉素浓度在10-320 mg/L之间呈现良好的线性关系，此方程可用于测定万古霉素缓释微球的载药率及药物缓释率。

2.3 正交优化设计微球制备方案以微球载药率与包封率之和(S=S1+S2)对微球评分。由表2可知，4个因素影响顺序依次为 A>B>C>D，优化后得出制备微球的最佳条件为A1B1C3D1，即油相9 mL：PLGA 500 mg；内水相1 mL：万古霉素300 mg；外水相：聚乙烯醇溶液浓度为3%；转速：400 r/min。

在实验中观察到搅拌速率对微球的粒径影响较大，但正交实验结果表明搅拌速率在400-1 200 r/min范围内时对微球的载药率和包封率影响较小，故对优选出的最佳条件进行了一次搅拌速率对粒径的单因素考察实验，以便日后可按需制备出不同粒径的缓释微球，见图4。

结果显示，不同搅拌速率对微球粒径影响较大，对载药包封率有轻微影响，搅拌速率越高微球粒径越小，在搅拌速度为1 200 r/min时可得出粒径为(102±37) μm的微球，见表3。

2.4 优化后参数验证按照上述正交设计实验及搅拌速率平行实验，选取其中微球粒径最小的A1B1C3D3参数，重复制备3批微球，结果产出稳定，制备工艺重现性良好。

2.4.1 外观形态及粒径的分布裸眼观察载药微球为白色细腻粉末，在电子显微镜下观察，微球大部分呈圆形，粒径成正态分布，平均粒径为102 µm，见图5A，B。微球粒径分布情况见图5C。

2.4.2 载药率、包封率优化后方案制备出微球：载药率为(17.40±1.87)%；包封率为(35.12±3.65)%。

2.4.3 药物释放第1天载万古霉素PLGA微球出现了明显的突释现象，释放率达(17.91±2.41)%，第2天后释放率逐渐降低放缓，12 d时累计释放(58.78±1.54)%，12-24 d平均每天释放1.41%，于24 d时累计释放(75.31±1.02)%，见图6。

2.5 微球体外直接抑菌性能对万古霉素PLGA缓释微球进行了为期24 d的体外抑菌实验。万古霉素最低抑菌浓度标准品对金黄色葡萄球菌有显著抑菌效果，抑菌圈直径约为1.8 cm；在PBS中释放3 d后的万古霉素缓释微球抑菌圈为(1.6±0.1) cm；释放6 d及12 d后的万古霉素微球抑菌直径稍有缩小但还是保持稳定的抑菌活性，释放24 d后的微球未见明显抑菌圈，见图7。

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引言

万古霉素是第一代糖肽类抗生素，来源于微生物代谢产物，其主要抑菌原理为阻断细菌细胞壁的合成，常用于治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，是对付顽固性耐药菌株的最后一道防线。万古霉素口服不易吸收，肌注可引起疼痛及局部坏死，常静滴用于治疗全身严重感染，由于其治疗剂量就可引起血栓性静脉炎、过敏反应及耳肾毒性等不良反应^[1]，临床上对万古霉素的全身应用剂量和持续时间有许多争议^[2]。基于它可直接作用于细菌而抑菌的特点^[3]，局部给药不仅能发挥其抗菌作用，而且还能大幅减少全身不良反应。

目前用于制备药物缓释微球的常用材料有聚乳酸、明胶、壳聚糖等有机高分子材料^[4-5]。聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid)，PLGA)属于聚乳酸类共聚物，在降解过程中转变为乳酸和羟基乙酸，乳酸在体内可进一步代谢最终生成CO₂和H₂O；羟基乙酸可经肾脏排出，在体内无蓄积毒副作用。被美国食品药品监督管理局批准并成为了多种药物的缓释载体，广泛应用于商业及实验研究，具有良好的生物相容性^[6]、机械强度^[7]、可控的生物降解性^[8]。PLGA作为载体的药物缓释微球还具有以下优点：①PLGA药物缓释微球释药速率平稳；②微球可在局部组织内长时间保持药物浓度；③不同直径微球和不同PLGA组成比的降解速率不同，从而可以根据微球直径或者改变聚乳酸和羟基乙酸的比值调整药物缓释时间^[9]。基于此，选用PLGA作为包封万古霉素的载体材料，将万古霉素用PLGA包载成微球后，可单独或与自体骨颗粒、生物可降解骨支架结合后植入骨感染缺损处^[10-13]，随着微球或复合微球材料在体内逐渐降解、吸收，在骨缺损感染处长时间维持有效抑菌浓度，实现抗感染作用。

作者选用的复乳溶剂挥发法是最简单易于实现的制备微球方法，这种方法多用于包载水溶性药物，但缺点是由于制备微球过程中水溶性药物向外水相的渗漏，导致包载药物微球中药量过低。此次实验采用正交设计优化万古霉素PLGA微球的制备，对微球进行观察及药物释放测定，以期得到包载药率较高、释放持久的万古霉素缓释微球。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

材料方法

1.1 设计正交设计实验。

1.2 时间及地点实验于2017年2至5月在兰州总医院骨科研究所完成。

1.3 材料 ATCC-25923金黄色葡萄球菌由兰州总医院检验科微生物室提供；PLGA购自美国Sigma公司、万古霉素购自希腊VIANEX S.A.(PLANT C)公司、二氯甲烷和聚乙烯醇(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；磁力搅拌器(型号85-2)购自江苏省金坛市友联仪器研究所、超声粉碎仪(型号JY92-2D)购自宁波新芝科器研究所、离心机(型号H1650R)购自长沙高新技术产业开发区湘仪离心机仪器有限公司、光学显微镜、电镜(型号JSM-5600LV)购自日本JEOL公司、紫外分光光度仪(型号G1115A)购自美国HP公司。

1.4 方法

1.4.1 万古霉素/PLGA微球的合成采用复乳溶剂挥发法(W/O/W)制备微球^[14]。称取300 mg万古霉素溶解在1 mL去离子水中作为内水相，取400 mg的PLGA溶解于9 mL二氯甲烷中作为油相，将内水相加入油相后用超声细胞粉碎机80 W超声乳化20 s间隔3 s共3次，制备出稳定的乳白色混合相(O/W)初乳；并将混合液逐滴快速加入外水相中 (40 mL 2%聚乙烯醇溶液)，磁力搅拌机固定转速持续搅拌过夜挥发有机溶剂，静置1 h待微球沉淀后，收集沉淀微球至离心管，蒸馏水洗涤离心负压冻干制得微球，见图1。

1.4.2 光镜观察形态取少量微球悬液置于载玻片上，在光显微镜下观察微球形状及大小。

1.4.3 制备万古霉素标准曲线称取万古霉素100 mg溶于100 mL PBS中，得1 g/L的万古霉素溶液。分别取0.5，1，2，4，8，16 mL溶液各加入50 mL容量瓶，补充PBS至50 mL，稀释后溶液浓度为10， 20， 40， 80， 160， 320 mg/L，用紫外分光光度仪测定260 nm处的吸光度值，绘制出实验用万古霉素在PBS液中的标准曲线。

1.4.4 四因素三水平正交设计选4个影响较大因素：A油相：二氯甲烷(9 mL)中加入的PLGA质量；B内水相：水溶液(1 mL)中万古霉素质量；C外水相：聚乙烯醇溶液(40 mL)浓度；D：搅拌转速。以载药率(S1)、包封率(S2)作为评价指标，正交设计以优化制备工艺。因素水平见表1。

1.4.5 优化后微球形态学观察及粒径的测定裸眼观察冻干收集的最佳工艺制得的微球大小形状，采用显微镜观察微球形态及计数法测定微球粒径，计数不少于500粒，绘出粒径分布图。取少量微球进行喷金制样，在扫描电镜下观察微球微观形貌。

1.4.6 载药率和包封率的测定称取干燥万古霉素缓释微球2 mg置于10 mL，离心管中，加入1 mL二氯甲烷，超声震荡使微球充分溶解，向离心管中加入4 mL PBS，在快速混匀器上震荡混匀后，静置10 min，10 000 r/min离心 5 min，取上清液在紫外分光光度仪中测量260 nm处吸光值，重复3次取平均值，利用标准曲线计算微球中载药质量。微球载药率=微球中药物质量/微球总质量；微球包封率=微球中药物总质量/投入药物总质量。

1.4.7 载万古霉素微球中药物释放的测定精确称取3份100 mg PLGA万古霉素缓释微球，分别加入50 mL PBS液，pH 7.4，密封置于37 ℃恒温平板摇床中匀速摇动，于1，2，3，6，12，24 d时取出0.5 mL溶液保存待测，并补回0.5 mL PBS。样品离心后取上清液，紫外分光光度仪检测其260 nm处吸光度，用标准曲线计算出药物浓度，取其平均值计算累计药物释放量和缓释率。

1.4.8 体外直接抑菌试验称取4份100 mg PLGA万古霉素缓释微球，分别加入50 mL PBS，密封置于37 ℃恒温孵箱中孵育，于第3，6，12，24天时弃去PBS进行干燥收集，各取出3份100 g微球置于接种有ATCC-25923金黄色葡萄球菌的琼脂固体培养基中，37 ℃培养24 h后，观察测量抑菌圈。

1.5 主要观察指标万古霉素/聚乳酸-羟基乙酸缓释微球电镜下的超微形态，微球粒径分布，微球载药率、包封率，微球的药物释放及体外抑菌性能。

1.6 统计学分析使用正交设计助手Ⅱv3.1软件(学韬软件工作室)对正交试验设计，并对实验数据进行了极差分析。文中的数据图形表示均采用GraphPad Prism 5(美国GraphPad软件公司)制作。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

讨论

目前，PLGA作为药物缓释载体的制备方法常有以下几种：单/复乳溶剂挥发法、喷雾干燥法、水凝胶模板法、微流体制造、同轴静电喷涂、相分离法、超临界CO₂流体萃取，其中以溶剂挥发法操作简单，容易重复，多用于医学生物科学研究，此方法可用于制备以PLGA为载体包载多种亲水性药物的微球，见表4。

实验采用复乳溶剂挥发法封装万古霉素，这也是目前制备万古霉素PLGA微球的最常用方法。采用载药率和包封率为微球的主要质量评价指标，正交实验结果显示，在制备微球的过程中，聚合物的浓度、溶剂的浓度和搅拌速度都可以影响微球包封率和粒径大小。微球的载药率、包封率与聚合物浓度、投入药物数量及外水相浓度在一定范围内成正比；与搅拌速率成反比，随着搅拌速率增快微球包封率及载药率轻微下降。但搅拌速率对微球粒径影响较大，速率越快微球粒径越小。

既往学者研究示骨组织工程支架孔径的选用一般在200-500 μm之间^[25-27]。选择100 μm粒径微球的好处有：①若微球体积太大，支架材料中可填充微球数量太少；②粒径较小的微球不仅能更好的分布在材料内部，还可以为细胞的爬入留下足够的空间。故实验中选用微球粒径最小的A1B1C3D3作为制备微球的实验参数。结果显示：实验可重复性好，微球呈规则圆形，粒径为(102±37) μm呈正态分布，载药率为17.40%；包封率为35.12%。体外药物释放曲线显示万古霉素在第1天时释放率就达到(17.91± 2.41)%，存在一定的突释，考虑系微球表面黏附或表浅层药物在早期释放到PBS中，第2天后大部分表层药物释放完，释放率逐渐降低放缓，到第12天过程中日均释放2.48%，12-24 d平均每天释放1.41%，于24 d时累计释放(75.31±1.02)%，于24 d时释放药物浓度明显高于最低抑菌浓度(1 mg/L)。体外直接抑菌实验在释放12 d时依然有良好的持续抑菌作用，在释放24 d后未见明显抑菌圈，可能原因是放置的微球数量较少，释放出的药物浓度未达到最小抑菌浓度。通常血液pH值为7.35-7.45，骨髓为7.30- 7.50，在此次体外药物释放的实验中，选用37 ℃ pH 7.4的PBS液，模拟体内血液或者骨髓中药物的释放，在这种水溶液中，PLGA会发生水解、断裂、药物释放；但在体内，不仅会发生水解，还会有细胞释放的多种酶和其他介质参与和促进水解、降解反应^[28]，最终代谢；此处只有材料的水解，而没有材料的降解，故不能完全代表体内的药物释放过程，还需进一步测定体内环境的药物释放特点。

临床中，与外界直接相通的耳鼻喉、肺呼吸系统，口腔、直肠消化道系统，时刻暴露在细菌环境中，局部常规用药虽可达到有效抑菌浓度，但需多频次的局部用药，患者常因依从性差而感染反复；许多深部软组织感染、骨感染难以治愈，其主要原因为病灶局部抗生素无法达到有效抑菌浓度，感染反复发作，致病菌耐药性增加，普通抗生素全身及局部治疗效果欠佳。2011年美国感染病学会指出用万古霉素进行治疗感染性疾病时血液药物谷浓度需达到10 mg/L以上，中国万古霉素临床应用专家共识(2011版)推荐万古霉素成人剂量为1 g/12 h^[29]，但经临床验证后发现有61.3%的患者达不到10 mg/L的血药谷浓度^[30]，常规静滴无法长时间维持有效的药物浓度；且有研究指出静脉给予常规万古霉素剂量后1.0-2.0 h血中药物浓度持续超过30 mg/L，长期全身持续应用可引起肾、听力损害等不良反应。实验中制备的万古霉素PLGA缓释微球释药速率平稳持久，500 mg万古霉素微球约含73.5 mg万古霉素，在50 mL的液体中持续24 d释放的每日药物浓度均高于10 mg/L的最低谷浓度，远高于最低抑菌浓度(1 mg/L)，在病灶局部长时间内维持有效的抗生素浓度，有效针对耐药金黄色葡萄球菌，显著减少了普通剂型给药产生的血药浓度峰谷现象、给药频次和总药量，降低局部药物刺激，减轻全身药物毒副作用。

虽然实验中制备的这种万古霉素PLGA缓释微球在药物的释放方面有一定的优势，然而溶剂挥发法需要可挥发有机溶剂的参与，这种工艺上的缺陷致使缓释微球内不可避免的残留少量毒性有机溶剂；由于外水相是水溶液，包封水溶性药物时，易发生药物外漏致使微球载药率、包封率不理想。如果利用超临界流体技术^[31]，PLGA正常的玻璃化温度为40-60 ℃，但其在CO₂超临界的环境下，塑化温度显著降低，无需溶剂就可溶解于CO₂超流体中，在PLGA临界状态性状为液体时无需任何有机溶剂参与便可与万古霉素混合，结合模板技术铸模^[32]，可精确控制微球粒径及形态，随后改变其临界条件，PLGA与万古霉素混合的液体状态转变为固态，析出微球。理论上此制作过程中无有机溶剂参与，收集时也不会有药物从微球中逸出，无药物及原料损失，可制作出包封率100%的微球，且可根据治疗需要改变载药率和药物缓释降解速率。

实验仅进行了万古霉素/PLGA缓释微球体外药物释放规律的探索，尚未进行细胞层面的安全性及动物体内的药物缓释实验。此后不仅要对其制作工艺进行提升改进，还需进一步将微球和细胞进行共培养观察其有无毒性及其对细胞增殖率的影响，后期在动物体内进行药物缓释测定及植入感染灶局部观察疗效。

综上，实验采用复乳溶剂挥发法，经正交设计优化实验方案后，选取油相9 mL：PLGA 500 mg；内水相1 mL：万古霉素300 mg；外水相：聚乙烯醇溶液浓度为3%，40 mL；转速：1 200 r/min的条件，稳定制备出了形态规整，粒径(102±37) μm，载药率为17.40%；包封率为35.12%，缓释超过24 d的万古霉素/PLGA缓释微球。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

正交设计优化万古霉素/聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球的制备及体外药物释放

Orthogonal optimization of vancomycin/poly(lactic-co-glycolic acid) microspheres: preparation and drug release in vitro

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